无细胞DNA的提取步骤说明

 时间:2026-02-12 04:02:41

1、1.请自行准备:无水乙醇、1.5mL离心管。

2.取出洗涤液,按以下操作:

a) 洗涤液A:21mL加入9mL无水乙醇;42mL加入18mL无水乙醇。

b) 洗涤液B:9mL加入21mL无水乙醇;18mL加入42mL无水乙醇。

c) 配制好的洗涤液如出现沉淀,可在37℃溶解,摇匀后使用。

3.取1.5mL离心管,加入200μL样本,4μLDNA Carrier混合均匀,加入300μL 裂解液及20μL 消化液,振荡混匀,56℃水浴10 分钟。

2、4.加入1000μL无水乙醇,轻轻颠倒混匀,如有半透明悬浮物,不影响DNA的提取与后续实验。

5.将吸附柱放入收集管内,将760μL上述溶液转入吸附柱内,静置2 分钟,12,000 rpm 4℃离心1 分钟,弃收集管内废液;

6.将吸附柱放回收集管内,将剩余760μL溶液转移至吸附柱内,重复步骤5。

7.将吸附柱放回收集管内,加500μL 洗涤液A至吸附柱内,12,000 rpm 4℃离心1 分钟,弃收集管内废液。

8.将吸附柱放回收集管内,加500μL 洗涤液B至吸附柱内,12,000 rpm 4℃离心1 分钟,弃收集管内废液。

3、9.将吸附柱放回收集管内,12,000 rpm 4℃离心2 分钟,离去残留的洗涤液。

10.取出吸附柱,放入新的1.5 mL 离心管内,加入30-50 μL 洗脱液,静置3 分钟,12,000 rpm 4℃ 离心2 分钟,收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。

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